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　　高二生物下册《血红蛋白的提取和分离》知识梳理

　　一、基础知识:

　　1 、分离生物大分子的基本思路是什么?

　　2 、不同蛋白质的特性在哪些方面存在差异?

　　3 、本课题我们将利用血红蛋白与杂质蛋白哪方面的差异进行提纯?

　　4 、为什么不用鸡的血红细胞而用人的血红细胞作为实验材料?

　　5 、用什么方法分离相对分子质量不同的蛋白质 ?

　　凝胶色谱法

　　㈠ 凝胶色谱法(分配色谱法)：

　　1、什么是凝胶?

　　2、什么是凝胶色谱法?

　　学生活动2:

　　3、凝胶色谱法的原理是什么?

　　4、请用自己的话总结出凝胶色谱法分离相对分子质量不同蛋白质的具体过程。

　　1 、什么是缓冲液?

　　2、 缓冲液的作用是什么?

　　学生活动3:

　　3、 缓冲液是如何配置的?你所学过的人体

　　血液的缓冲液有哪些?

　　4、 本实验加的是什么缓冲液?为何要加缓冲液?

　　(二)、缓冲溶液

　　1 、什么是电泳?

　　2、 影响电泳迁移速度的因素有哪些?

　　学生活动4:

　　4、电泳分离各种分子的原理是什么?

　　(三)、电泳

　　3、 如何消除电荷对电泳迁移速度的影响?

　　5 、请描述电泳的过程?

　　电泳检测结果

　　二、实验操作

　　蛋白质的提取和分离一般分为四步：

　　(1)样品处理：包括洗涤红细胞;血红蛋白稀释;离心等操作收集到的血红蛋白溶液。

　　(2)粗分离：透析除去分子较小的杂质。

　　(3)纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。

　　(4)纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。

　　(一)样品处理

　　1、红细胞的洗涤：

　　目的是去除杂蛋白。要加入柠檬酸钠防止血液凝固;离心将血液分层，用胶头吸管吸出黄色血浆;用生理盐水洗涤。

　　2、血红蛋白的释放：

　　在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放

　　3、分离血红蛋白溶液：

　　离心分层;滤纸过滤去除脂溶性沉淀层;分液漏斗分出红色透明液体。

　　4、透析：

　　装入透析袋并置于磷酸缓冲液中(PH为7.0)透析。
 

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